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Campo DCValorIdioma
dc.creatorOLIVEIRA, Josimary Morais Vasconcelos-
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/6179492870346851por
dc.contributor.advisor1ARIOSA, Marília Caixeta Franco-
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/3413970389346369por
dc.contributor.advisor-co1PADOVAN, Ana Carolina Barbosa-
dc.contributor.referee1LYON, Juliana Pereira-
dc.contributor.referee2DIAS, Amanda Latércia Tranches-
dc.date.accessioned2019-04-17T13:34:35Z-
dc.date.issued2018-01-26-
dc.identifier.citationOLIVEIRA, Josimary Morais Vasconcelos. Detecção e quantificação da expressão do gene ERG11 de Candida albicans sob diferentes concentrações de fluconazol. 2018. 67 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Alfenas, Alfenas, MG, 2018.por
dc.identifier.urihttps://bdtd.unifal-mg.edu.br:8443/handle/tede/1352-
dc.description.resumoEspécies de Candida habitam o corpo humano, não causam doenças em organismos considerados saudáveis, entretanto podem levar a infecções graves naqueles com alterações nos mecanismos de defesa e/ou quando ocorre comprometimento de barreiras anatômicas. O agente etiológico mais comum das infecções causadas por Candida spp. é C. albicans, inclusive no Brasil. Há muitos anos, antifúngicos da classe dos azóis vêm sendo prescritos para tratamentos de tais infecções, porém a incidência de casos de resistências tem sido documentada. A superexpressão do gene ERG11 e bombas de efluxo e mutações no gene ERG11 são descritos como mecanismos moleculares de resistência a azóis em Candida spp. Desta forma, analisar a expressão gênica do ERG11 de isolados clínicos e de fontes de colonização ambiental foi a proposta deste estudo, envolvendo tratamentos sob concentrações inibitórias e subinibitórais de fluconazol (FLU), nunca antes investigada. Assim, foram utilizados três isolados provenientes de fontes de colonização de ambiente hospitalar e cinco isolados clínicos, além da cepa padrão ATCC 10231 cujas concentrações inibitórias mínimas para fluconazol foram obtidas de acordo com o protocolo EUCAST Definitive Document EDef 7.1 (2008). Os tratamentos consistiram de concentrações inibitórias mínimas (CIM) e subinibitórias equivalentes a 1/4 e 1/2 da CIM do antifúngico e na ausência do mesmo. As quantificações das expressões por RT-qPCR foram realizadas para os genes ERG11, e o normalizador Actina. As análises de expressão relativa foram calculadas utilizando o método 2-ΔΔCt. Observou-se no comportamento de todos os isolados analisados, independente da origem de isolamento, inclusive a cepa padrão ATCC 10231, aumento significativo de expressão do gene ERG11 em relação aos tratamentos com CIM, 1/2 e 1/4 da CIM de FLU quando comparados aos mesmos isolados na ausência de FLU. Esse aumento variou entre 1,086 a 126,105. No grupo de isolados clínicos, aquele que mais expressou o gene alvo foi o 220 (126,10) e no grupo de colonização ambiental foi o isolado 521 (40,79), ambos no tratamento da CIM de fluconazol. Em geral, a maior dose de fluconazol (CIM) foi a que mais influenciou os isolados a expressarem ERG11, seguido dos tratamentos com 1/2 e 1/4 da CIM. Estes resultados, de aumento da expressão de isolados clínicos de C. albicans é relevante, especialmente nos casos de pacientes em tratamento profilático, quando o antifúngico ao invés de proteger o paciente da infecção poderia estar estimulando o patógeno. No caso dos isolados de colonização ambientais terem apresentado o mesmo comportamento, gera um alerta para a importância na higienização no ambiente hospitalar e antissepsia dos profissionais da área da saúde.por
dc.description.abstractCandida species inhabit the human body, don’t cause diseases in organisms considered healthy, however can lead to serious infections in those with changes in the defense mechanisms and / or impairment of anatomical barriers. The most common etiological agent of infections caused by Candida spp. is C. albicans, including in Brazil. Many years ago, antifungal drugs of the azole class have been prescribed for treatments of such infections, however the incidence of cases of resistance has been documented. Overexpression of the ERG11 gene and efflux pumps and mutations in the ERG11 gene are described as molecular mechanisms of resistance to azoles in Candida spp. In this way, the analysis of the ERG11 gene expression of clinical isolates and sources of environmental colonization was the proposal of this study, involving treatments under fluconazole inhibitory and subinhibitory concentrations (FLU), never researched before. Thus, three isolates from hospital environment colonization sources and five clinical isolates were used, in addition to the standard strain ATCC 10231 whose minimum inhibitory concentrations for fluconazole were obtained according to the EUCAST Protocol De fi nitive Document EDef 7.1 (2008). The treatments consisted of minimal inhibitory concentrations (MIC) and subinhibitory equivalent to 1/4 and 1/2 of the CIM of antifungal and in the absence of the same. Quantifications of the RT-qPCR expressions were performed for the ERG11 genes, and the Actin normalizer. Relative expression analyzes were calculated using the 2-ΔΔCt method. It was observed the behavior of all the isolates analyzed, independent of the origin of isolation, including the standard strain ATCC 10231, significant increase of ERG11 gene expression in relation to treatments with MIC, 1/2 and 1/4 FLU MIC when compared to the same isolates in the absence of FLU. This increase ranged from 1,086 to 126,105. In the group of clinical isolates, the one that most expressed the target gene was 220 (126.10 times) and in the environmental colonization group was the 521 isolate (40,79), both in the treatment of MIC of fluconazole. In general, the highest dose of fluconazole (MIC) was the one that most influenced the isolates expressing ERG11, followed by treatments with 1/2 and 1/4 MIC. These results of increased expression of clinical isolates of C. albicans are relevant, especially in cases of patients in prophylactic treatment, when antifungal rather than protecting the patient from infection could be stimulating the pathogen. The fact of the environmental colonization isolates had presented the same behavior, it generates an alert for the importance in hygiene in the hospital environment and antisepsis of health professionals.eng
dc.description.provenanceSubmitted by Marlom César da Silva (marlom.silva@unifal-mg.edu.br) on 2019-04-17T13:33:30Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Josimary Morais Vasconcelos Oliveira.pdf: 1465983 bytes, checksum: 95c9d60a36992f2a82412e03c938f24f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)eng
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dc.formatapplication/pdf*
dc.languageporpor
dc.publisherUniversidade Federal de Alfenaspor
dc.publisher.departmentInstituto de Ciências da Naturezapor
dc.publisher.countryBrasilpor
dc.publisher.initialsUNIFAL-MGpor
dc.publisher.programPrograma de Pós-graduação em Ciências Biológicaspor
dc.rightsAcesso Abertopor
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/-
dc.subjectGenespor
dc.subjectCandida albicanspor
dc.subjectExpressão Gênicapor
dc.subjectFluconazolpor
dc.subjectTestes de Sensibilidade Microbianapor
dc.subject.cnpqCIENCIAS BIOLOGICASpor
dc.titleDetecção e quantificação da expressão do gene ERG11 de Candida albicans sob diferentes concentrações de fluconazolpor
dc.typeDissertaçãopor
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