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Tipo do documento: Dissertação
Título: Avaliação da resposta imune inata após infecção pelo zika virus em macrófagos previamente infectados com dengue virus
Autor: BRANCAGLION, Gustavo andrade 
Primeiro orientador: ALMEIDA, Leonardo Augusto de
Primeiro membro da banca: PRUDÊNCIO, Carlos Roberto
Segundo membro da banca: IKEGAKI, Masaharu
Resumo: O Dengue virus (DENV) é um vírus de RNA da família Flaviviridae compreendendo quatro sorotipos relacionados, mas antigenicamente distintos. A dengue é a principal doença viral transmitida por artrópodes no mundo e representa um importante problema de saúde humana global, especialmente no Brasil onde em 2016 também foi registrado o maior surto de infecção pelo Zika virus (ZIKV), outro flavivírus com características genômicas e estruturais semelhantes ao DENV. A co-circulação de DENV e ZIKV é realidade no Brasil fornecendo evidências, inclusive, da existência de uma co-infecção. A resposta imune inicial contra ZIKV e DENV em células é mediado pelos receptores da imunidade inata que ativam sinalizações para expressão de genes antivirais ou pró-inflamatórios. Dessa forma, o presente estudo tem por finalidade uma melhor compreensão da resposta imune inata frente à infecção pelo ZIKV em macrófagos previamente infectados pelo DENV. Para isso, células da medula óssea de camundongos C57BL/6 foram diferenciadas em macrófagos (BMDM) e confirmadas por citometria de fluxo, cujo resultado demonstrou que mais de 95% das células diferenciadas eram CD11b+. Os BMDMs foram infectados independentemente com os quatro sorotipos de DENV (MOI 1:1) e após 12 horas essas células foram infectadas com o ZIKV (MOI 0.1:1). Ao final de mais 12 horas, as células foram analisadas quanto à expressão dos marcadores de ativação de macrófagos, CD80 e CD86, por citometria de fluxo e microscopia de fluorescência. A expressão diferencial de genes pró-inflamatórios e anti-viral foi realizada por qPCR. A expressão de IFN- foi diminuída em todos os grupos analisados. Não houve diferença na expressão dos marcadores CD80/CD86 nos BMDMs previamente infectados com DENV seguidos da infecção pelo ZIKV, exceto para o sorotipo 4, foi possível observar um aumento expressivo de ambos marcadores. Contudo, a expressão diferencial tanto de TNF- quanto IL-1 foi drasticamente reduzida nesse grupo. Com essa diminuição observou-se o aumento da viabilidade celular frente à diminuição na produção da citocina TNF-α. Análises de bioinformática indicaram um possível controle da expressão de TNF- e IL-1 pelo mmu-miR-181a-5p, que é induzido pela ativação da via de NF-B. Para isso, a expressão desse microRNA será avaliada com o objetivo de entender melhor a relação entre ativação de BMDMs pelos marcadores de superfície CD80/CD86 juntamente com a modulação da ativação de TNF- e IL-1 no modelo de infecção pelo DENV4 seguido da infecção do ZIKV.
Abstract: Dengue vIrus (DENV) is a RNA virus belonging to Flaviviridae family comprising four antigenic distinct sorotypes. Dengue is the main arthropod-transmitted virus in the world representing a worldwide public health problem, specially in Brazil, where in 2016 was also registered the greatest outbreak of Zika virus (ZIKV), which shares genomic and structural characteristics to DENV. DENV and ZIKV co-circulation is real in Brazil providing evidences of co-infection. The innate immune response against DENV and ZIKV is mediated by pattern recognition receptors that trigger intracellular signaling to antiviral or inflammatory responses. Regarding that, the main goal of this work is to better understand the innate immunity response to ZIKV by macrophages previously infected to DENV. To access this, bone marrow cells from C57BL/6 mice were derived to macrophages (BMDMs) that were confirmed by flow cytometry with more than 95% of the cells CD11b+. BMDMs were infected with the four serotypes of DENV independently for 12 hours following ZIKV infection for more 12 hours. Twenty-four hours post infection, macrophage activation markers CD80 and CD86 were accessed by flow cytometry and fluorescence microscopy. The pro-inflammatory or antiviral expression genes were evaluated by qPCR. IFN- presented to be down-regulated in all analyzed groups. It was not observed differences in CD80 or CD86 expression in ZIKV infected BMDMs previously infected with DENV excepted to serotype 4, where it was observed an augmentation of both activation markers. On the other hand, TNF- and IL-1 showed to be down-regulated when compared to non-infected or only DENV4 infected cells. With this decrease the increase in cell viability was observed in relation to the decrease in the production of the cytokine TNF-α. Bioinformatic analysis indicated a putative control of both cytokine expression by mmu-miR-181a-5p which is also up-regulated to innate immunity response. Further experiments will be conducted to evaluate this miRNA expression focusing on to understand the relationship between BMDM activation markers and TNF- or IL-1 modulation in DENV4 model of infection followed ZIKV infection.
Palavras-chave: Dengue
Zika virus
Imunidade Inata
Macrófagos
MicroRNAs
Área(s) do CNPq: CIENCIAS BIOLOGICAS
Idioma: por
País: Brasil
Instituição: Universidade Federal de Alfenas
Sigla da instituição: UNIFAL-MG
Departamento: Instituto de Ciências Biomédicas
Programa: Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas
Citação: BRANCAGLION, Gustavo andrade. Avaliação da resposta imune inata após infecção pelo zika virus em macrófagos previamente infectados com dengue virus. 2019. 81 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Alfenas, Alfenas, MG, 2019.
Tipo de acesso: Acesso Embargado
Endereço da licença: http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
URI: https://bdtd.unifal-mg.edu.br:8443/handle/tede/1538
Data de defesa: 11-Fev-2019
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