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https://bdtd.unifal-mg.edu.br:8443/handle/tede/1817
Tipo do documento: | Dissertação |
Título: | Avaliação do efeito de nanopartículas de albumina sérica bovina associadas ao ácido poliinosínico-policitidílico poli (I:C) sobre o fenótipo de células dendríticas. |
Autor: | VIEIRA JÚNIOR, João Carlos Vilela ![]() |
Primeiro orientador: | COELHO, Luiz Felipe Leomil |
Primeiro membro da banca: | MAGALHÃES, José Carlos de |
Segundo membro da banca: | MARQUES, Marcos José |
Resumo: | Nanopartículas são estruturas microscópicas que possuem dimensões na faixa de tamanho em torno de 1 nm a 100 nm. As nanopartículas podem atuar como sistemas de entrega de antígenos em formulações vacinas. A maioria das nanopartículas (NPs) possui baixa toxicidade quando são inoculadas ou injetadas em animais. A magnitude da toxicidade das NPs depende de inúmeros fatores, tais como material, via de administração da exposição, tamanho e forma. Elas podem induzir inflamação envolvendo neutrófilos, macrófagos, células dendríticas e outras células efetoras. As células dendríticas (DCs), possuem papel fundamental na mediação da resposta imune inata e na indução da resposta imune adaptativa. A albumina é um polímero natural, biocompatível, biodegradável, não tóxico e não imunogênico e, devido a essas características, as NPs feitas de albumina são promissores sistemas de administração de medicamentos ou antígenos. O presente trabalho possui o objetivo, de produzir e avaliar o efeito de nanopartículas de albumina sérica bovina (BSA) associadas ao ácido poliinosínico-policitidílico (NPPI) sobre o fenótipo de células dendríticas derivadas de medula óssea. No preparo das NPPI foi utilizada a técnica de co-acervação e ligação cruzada com glutaraldeído. Foi feita a análise por DLS, que mostrou que as nanopartículas produzidas em dois pHs testados (5,0 e 7,0) apresentaram resultados discordantes em relação ao tamanho, carga e PDI. As NPPI produzidas em pH 7,0 tiveram um menor tamanho e menor índice de PDI, a partir de então todos os experimentos foram realizados com esse pH. O tamanho da partícula, a sua distribuição e o potencial Zeta foram determinados pela técnica de espalhamento dinâmico de Luz. A morfologia das NPs foi determinada por microscopia de força atômica. As NPPI apresentam tamanho de 497±140,4 nm, carga de -33,66±3,93 mV, PDI de 0,38±0,06 e forma esférica. As análises para determinar a taxa de encapsulamento indicam que se obteve 100% de encapsulamento do ácido poliinosínico-policitidílico poli (I:C). Células da medula óssea de camundongos C57BL/6 foram obtidas e diferenciadas em células dendríticas. Para verificar a estabilidade das NPPI em diferentes temperaturas, estas foram incubadas a 4oC e 37oC por 1, 2, 4 e 7 dias. O primeiro parâmetro a ser analisado foi a quantificação de poli (I:C) no sobrenadante das nanopartículas após a incubação. Os resultados indicaram, que os valores de densidade de ótica (D.O), foram relativamente baixos, indicando que não houve a liberação de poli (I:C) até o sétimo dia de análise. As células foram tratadas com as nanopartículas por 48 horas e o estado de ativação e maturação das células dendríticas foi monitorado através de qPCR para o mRNA IFN-β, CD40 e CD86. Os resultados indicaram um aumento da expressão do mRNA dos genes IFN-β e CD40 nas células tratadas com NPPI. A análise histopatológica da pele de animais inoculados com NPPI demonstrou o recrutamento de células inflamatórias na pele. Os animais do grupo NPVs, apresentaram áreas epidérmicas livre de queratina, e leve aumento da celularidade na derme profunda. Os animais dos grupos NPPI e poli (I:C) apresentaram padrão morfológico epidérmico semelhante ao grupo PBS. Em relação a contagem de células no tecido analisado foi possível observar um aumento significativo da celularidade em todos os grupos tratados com nanopartículas (NPPI, NPVs) e no grupo inoculado com poli (I:C). Portanto, os resultados demonstraram o potencial das NPPI em serem utilizadas como adjuvante em plataformas vacinais. |
Abstract: | Nanoparticles (NPs) are microscopic structures that have dimensions between 1 nm to 100 nm and can act as delivery systems for antigens on vaccine formulations. NPs can have low toxicity when they are inoculated or injected into animals. The toxicity of NPs depends on several factors, such as type of material, route of administration, size and shape. NPs can induce inflammation with involvement of neutrophils, macrophages, dendritic cells and other effector cells. Dendritic cells (DCs) have a fundamental role in mediating the innate immune response and in the induction of the adaptive immune response. Albumin is a natural, biocompatible, biodegradable, non- toxic and non-immunogenic polymer and, due to these characteristics, albumin NPs are promising for develop drug or antigen delivery systems. The present work aims to produce and evaluate the effect of bovine serum albumin nanoparticles associated with polyinosinic-polycytidyl acid (NPPI) on the phenotype of bone marrow derived dendritic cells. The particle size, its distribution and the Zeta potential were determined by the dynamic light scattering technique. The morphology of NPs was determined by atomic force microscopy. The BSA nanoparticles containing polyinosinic-polycytidyl acid poly (I: C) have a 497±140,4 nm, -33,66±3,93 mV, PDI of 0,38±0,06 and a spherical shape. Studies for determinate the encapsulation rate indicate that 100% of poly (I: C) encapsulation was obtained. Bone marrow derived cells from C57BL/6 mice were obtained and differentiated into dendritic cells (DCs). DCs were treated with the nanoparticles for 48 hours and the state of activation and maturation of these cells were monitored using qPCR for the IFN-β, CD40 and CD86 mRNAs. The results indicate an increase in mRNA expression of the IFN-β and CD40 genes in cells treated with NPPI. Histopathological analysis of the skin of animals inoculated with NPPI showed recruitment of inflammatory cells in the skin. Therefore, the results demonstrated the potential of NPPI to be used as an adjuvant in vaccine platforms. |
Palavras-chave: | Nanopartículas Células dendríticas Albumina sérica bovina |
Área(s) do CNPq: | CIENCIAS BIOLOGICAS |
Idioma: | por |
País: | Brasil |
Instituição: | Universidade Federal de Alfenas |
Sigla da instituição: | UNIFAL-MG |
Departamento: | Instituto de Ciências da Natureza |
Programa: | Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas |
Citação: | VIEIRA JÚNIOR, João Carlos Vilela. Avaliação do efeito de nanopartículas de albumina sérica bovina associadas ao ácido poliinosínico-policitidílico poli (I:C) sobre o fenótipo de células dendríticas.. 2021. 58 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Alfenas, Alfenas, MG, 2021 |
Tipo de acesso: | Acesso Embargado |
Endereço da licença: | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ |
URI: | https://bdtd.unifal-mg.edu.br:8443/handle/tede/1817 |
Data de defesa: | 26-Mar-2021 |
Aparece nas coleções: | Mestrado |
Arquivos associados a este item:
Arquivo | Descrição | Tamanho | Formato | |
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Dissertação de João Carlos Vilela Vieira Júnior.pdf | 1,13 MB | Adobe PDF | Baixar/Abrir Pré-Visualizar |
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