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Campo DCValorIdioma
dc.creatorSANTOS, Ana de Souza-
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/7636762124852269por
dc.contributor.advisor1ALMEIDA, Leonardo Augusto de-
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/5381507919608022por
dc.contributor.referee1RODRIGUES, Marina Quádrio Raposo Branco-
dc.contributor.referee2NOVAES, Rômulo Dias-
dc.date.accessioned2022-11-10T13:58:53Z-
dc.date.available2023-11-07por
dc.date.issued2022-10-06-
dc.identifier.citationSANTOS, Ana de Souza. Avaliação da imunogenicidade de epítopos da proteína estrutural spike do SARS-CoV-2 racionalmente selecionados por vacinologia reversa e associados ao BCG vacinal como carreador e indutor da imunidade inata treinada. 2022. 96 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Alfenas, Alfenas, MG, 2022.por
dc.identifier.urihttps://bdtd.unifal-mg.edu.br:8443/handle/tede/2123-
dc.description.resumoA COVID-19 está relacionada a uma síndrome respiratória aguda grave no trato respiratório inferior causada pelo SARS-CoV-2. Análises observacionais mostraram que pessoas vacinadas com o Bacilo Calmette-Guérin (BCG) têm menor probabilidade de desenvolver formas graves da COVID-19. Assim, foi hipotetizado que a associação desse bacilo com epítopos imunogênicos selecionados por técnicas de vacinologia reversa das proteínas estruturais do SARS-CoV-2 pode acarretar o desenvolvimento de uma resposta imune inata treinada capaz de aumentar a resposta imune protetora específica contra esse vírus. Assim, esse trabalho teve como objetivo identificar epítopos imunoestimulantes da proteína spike do SARS-CoV-2 e associá-los ao BCG vacinal para a estimulação de uma resposta imune inata treinada. Para isso, 53.838 genomas depositados em bancos de dados do SARS-CoV-2 foram utilizados e as putativas sequências proteicas preditas da spike do vírus foram alinhadas para a determinação de uma proteína consenso mundial. A estrutura dessa proteína foi predita por modelagem molecular e foi possível identificar dois peptídeos de maior promiscuidade de se ligar aos BCR, MCH-I e MHC-II, assim como as características quanto a estabilidade, imunogenicidade, não alergenicidade, e com propriedades físico- químicas compatíveis para o desenvolvimento de peptídeos imunogênico. Por ancoragem molecular foi possível identificar os pontos e as forças de interação com as moléculas de MHC. O epítopo 1 apresenta pontos de alterações já identificadas nas variantes do novo coronavírus, assim como um ponto de n- glicosilação. Por outro lado, o epítopo 2 não se encontra em posições de alta variabilidade nas variantes em circulação no momento, incluindo a nova variante ômicron. Duas formulações contendo o BCG e cada peptídeo foram utilizadas para estimular macrófagos derivados da medula óssea murina demonstrando um aumento expressivo na secreção de IL-6, IL-1 e TNF- quando do contato prévio com essa formulação. Ademais, a via de MAPK se mostrou mais ativada nessas células com destaque para maior ativação de p38. Análises in vivo, utilizando camundongos C57BL/6 vacinados intramuscularmente com as formulações, mostraram um aumento expressivo na produção de IgG total, IgG1 e IgG2c específicos para os peptídeos da proteína spike no soro, assim como a secreção aumentada de IFN-, IL-6, TNF-α e IL-17. Em suma, a abordagem racional de predição de epítopos imunogênicos ao serem associados ao BCG vacinal foi capaz de induzir a imunidade efetiva tanto inata quanto adaptativa em modelos in vitro e in vivo.por
dc.description.abstractCOVID-19 is related to a severe acute respiratory syndrome in the lower respiratory tract caused by SARS-CoV-2. Observational analyzes have shown that people vaccinated with Bacillus Calmette-Guérin (BCG) are less likely to develop severe forms of COVID-19. Thus, it was hypothesized that the association of this bacillus with immunogenic epitopes selected by reverse vaccinology techniques of the structural proteins of SARS-CoV-2 may lead to the development of a trained innate immune response capable of increasing the protective immune response against this virus. Thus, this work aimed to identify immunostimulatory epitopes of the SARS-CoV-2 spike protein and associate them with vaccine BCG for the specific stimulation of a trained innate immune response. For this, 53.838 genomes deposited in SARS-CoV-2 databases were used and the putative predicted protein sequences of the virus spike were aligned to determine a worldwide consensus protein. The structure of this protein was predicted by molecular modeling and it was possible to identify two peptides with greater promiscuity to bind to BCR, MCH-I and MHC-II, as well as the characteristics regarding stability, immunogenicity, non-allergenicity, and physical-chemical properties compatible chemicals for the development of immunogenic peptides. By molecular anchoring it was possible to identify the points and the forces of interaction with the MHC molecules. Epitope 1 presents points of alterations already identified in the novel coronavirus variants, as well as an n-glycosylation point. On the other hand, epitope 2 is not found in positions of high variability in the variants currently in circulation, including the new variant omicron. Two formulations containing BCG and each peptide were used to stimulate macrophages derived from murine bone marrow, demonstrating a significant increase in the secretion of IL-6, IL-1 and TNF- upon previous contact with this formulation. In addition, the MAPK pathway was more activated in these cells, highlighting the greater activation of p38. In vivo analyzes using C57BL/6 mice vaccinated intramuscularly with the formulations showed a significant increase in the production of total IgG, IgG1 and IgG2c specific for the spike protein peptides in serum, as well as increased secretion of IFN-γ, IL- 6, TNF-α and IL-17. In summary, the rational approach of predicting immunogenic epitopes when associated with vaccine BCG was able to induce effective immunity both innate and adaptive in vitro and in vivo models.eng
dc.description.provenanceSubmitted by Marlom César da Silva (marlom.silva@unifal-mg.edu.br) on 2022-11-10T13:58:03Z No. of bitstreams: 2 Dissertação de Ana de Souza Santos.pdf: 8650611 bytes, checksum: f430a73c0985eed6fe49edc2f68195a7 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)eng
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dc.description.sponsorshipPrograma Institucional de Bolsas de Pós-Graduação - PIB-PÓSpor
dc.formatapplication/pdf*
dc.languageporpor
dc.publisherUniversidade Federal de Alfenaspor
dc.publisher.departmentInstituto de Ciências da Naturezapor
dc.publisher.countryBrasilpor
dc.publisher.initialsUNIFAL-MGpor
dc.publisher.programPrograma de Pós-graduação em Ciências Biológicaspor
dc.rightsAcesso Embargadopor
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/-
dc.subjectCOVID-19por
dc.subjectVacinologia reversapor
dc.subjectEpítopospor
dc.subjectBCGpor
dc.subjectImunidade inata treinadapor
dc.subject.cnpqCIENCIAS BIOLOGICASpor
dc.titleAvaliação da imunogenicidade de epítopos da proteína estrutural spike do SARS-CoV-2 racionalmente selecionados por vacinologia reversa e associados ao BCG vacinal como carreador e indutor da imunidade inata treinadapor
dc.typeDissertaçãopor
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