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dc.creatorLOPES, Asafe Costa-
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/7910315148871588por
dc.contributor.advisor1NOGUEIRA, Ester Siqueira Caixeta-
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/6395872557646690por
dc.contributor.referee1PAFFATO JUNIOR, Valdemar Antonio-
dc.contributor.referee2SILVA, Rubia Bueno da-
dc.contributor.referee3NEVES, Jairo Pereira-
dc.contributor.referee4FERNANDES, Carlos Antônio de Carvalho-
dc.date.accessioned2022-12-05T16:53:17Z-
dc.date.issued2022-09-28-
dc.identifier.citationLOPES, Asafe Costa. Lipidoma e expressão gênica de oócitos obtidos de doadoras de genótipos leiteiros bos taurus, Bos indicus e Bos taurus/indicus. 2022. 79 f. Tese (Doutorado em Biociências Aplicada à Saúde) - Universidade Federal de Alfenas, Alfenas, MG, 2022.por
dc.identifier.urihttps://bdtd.unifal-mg.edu.br:8443/handle/tede/2129-
dc.description.resumoNos últimos anos observou-se um aumento expressivo do uso da produção in vitro de embriões (PIVE) em raças leiteiras. É conhecido que diferenças no potencial de desenvolvimento oocitário entre fêmeas de raças taurinas (Bos taurus) e zebuínas (Bos indicus) afetam consideravelmente a eficiência e a viabilidade econômica da PIVE e que o metabolismo lipídico pode estar relacionado a variações individuais no potencial de desenvolvimento oocitário, o presente estudo teve por objetivo avaliar o conteúdo e o perfil lipídico, além da expressão de genes envolvidos no metabolismo lipídico em oócitos de doadoras das raças Gir (Bos indicus), Holandesa (Bos taurus) e mestiças 1/2 Holandês x 1/2 Gir (Bos taurus/indicus). Os complexos cumulus-oócitos (COCs) foram recuperados por aspiração folicular e processados para separar os oócitos das células do cumulus. Os oócitos foram então direcionados para as seguintes análises: avaliação semi-quantitativa das gotas lipídicas citoplasmáticas através da coloração por Sudan Black B, análise do perfil lipídico através da espectrometria de massas utilizando o monitoramento de reações múltiplas (MRM) e análise da abundância do RNAm de genes envolvidos no metabolismo lipídico através da reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real. A concentração de triacilgliceróis, éster de colesterol, diacilglicerol, fosfatidilinositol e ceramida não variou entre as diferentes raças. Entretanto, a abundância total de fosfatidilcolina foi maior nos oócitos das doadoras Gir comparado com as Holandesas e mestiças, e a abundância de esfingomielina e fosfatidiletanolamina foi maior nos oócitos Gir comparado com as Holandesas, enquanto as mestiças não diferiram das demais raças. A análise discriminante por mínimos quadrados parciais (PLS-DA) mostrou que houve estratificação entre as raças considerando os lipídios de membrana, indicando que a raça teve efeito no perfil dos lipídios de membrana nos oócitos e, a ANOVA determinou que 19 espécies lipídicas foram diferentes entre as raças. O nível de RNAm da SPHK2, ACSL3 e CPT2 foi maior nos oócitos imaturos das doadoras Gir e mestiças, enquanto a abundância do RNAm da LRAT foi maior nos oócitos imaturos dos animais Gir em relação as Holandesas, tendo os oócitos dos animais mestiços uma abundância intermediária de LRAT. A expressão de ATX, CPT1B, ACADL e CD36 foi maior nos oócitos imaturos de Gir comparado com as Holandesas. Em relação aos oócitos maturados in vitro, a abundância de ATX, CPT1B e CD36 foi maior nos oócitos das vacas Gir e mestiças comparada com as Holandesas, enquanto a abundância do RNAm da LRAT e ACADL foi maior nos oócitos dos animais Gir em relação as Holandesas, tendo os oócitos dos animais mestiços uma abundância intermediária. Além disso, a expressão de SPHK1 e CPT1A também foi maior nos animais Gir em relação aos Holandeses. O perfil lipídico e transcricional pôde ser mais claramente discriminado entre os oócitos das raças puras, Gir e Holandesa. A maior concentração de lipídios de membrana nos oócitos Gir, associada à maior abundância de genes que metabolizam esses lipídios, indicam haver condições metabólicas que favoreçam a geração de mensageiros químicos importantes para o desenvolvimento do oócito nos animais Gir em relação aos Holandeses.por
dc.description.abstractThe use of in vitro embryo production (IVP) for dairy breeds has increased significantly in recent years. Differences in the number and developmental potential of oocytes between female taurine (Bos taurus) and zebu (Bos indicus) breeds affect the efficiency and economic viability of IVP. The aim of this study was evaluate the lipid profile and content, as well as the mRNA abundance of genes involved in lipid metabolism, in oocytes recovered from the following dairy breeds: Gir (Bos indicus), Holstein (Bos taurus), and their crossbreeds (1/2 Holstein × 1/2 Gir). Cumulus-oocyte complexes (COCs) were recovered by follicular aspiration, and immature COCs were processed to separate oocytes from cumulus cells, and then subjected to semi- quantitative evaluation of oocyte cytoplasmic lipid droplets using Sudan Black B staining, analysis of the lipid profile through mass spectrometry using multiple reaction monitoring, and abundance analysis of the mRNA of genes involved in lipid metabolism through real-time polymerase chain reaction. To analyze gene expression in oocytes matured in vitro, immature COCs were subjected to in vitro maturation for 24 h. Cytoplasmic lipid content was found to be similar in immature oocytes obtained from Gir, Holstein, and crossbred donors. The concentrations of triacylglycerols, cholesteryl ester, diacylglycerol, phosphatidylinositol, and ceramide did not vary between breeds. The total abundance of phosphatidylcholine was higher in oocytes from Gir donors than in those from Holsteins and crossbreeds, and the abundance of sphingomyelin and phosphatidylethanolamine was higher in Gir oocytes than in Holstein oocytes, whereas that of crossbreeds did not differ from that of the other breeds. Partial least squares discriminant analysis showed stratification between breeds in terms of membrane lipids, indicating that breed had an effect on the profile of membrane lipids in oocytes, and 19 lipid species were determined to be different between breeds using analysis of variance. The mRNA levels of SPHK2, ACSL3A, and CPT2 were higher in immature oocytes from Gir and crossbred donors, whereas the abundance of LRAT mRNA was higher in immature oocytes from Gir donors than in Holstein oocytes, with oocytes from crossbred donors having an intermediate LRAT mRNA abundance. The expression levels of ATX, CPT1B, ACADL, and CD36 were higher in immature Gir oocytes than in Holstein oocytes. In relation to in vitro- matured oocytes, the abundance of ATX, CPT1B, and CD36 was higher in oocytes from Gir and crossbred cows than in those from Holstein cows, whereas the abundance of LRAT and ACADL mRNA was higher in oocytes from Gir cows than in those from Holstein cows, with oocytes from crossbred cows having an intermediate abundance. Furthermore, the expression of SPHK1 and CPT1A was higher in Gir cows than in Holstein cows. Lipid and transcriptional profiles showed clear differences between purebred, Gir, and Holstein oocytes. The higher concentration of membrane lipids in Gir oocytes, associated with the greater abundance of genes that metabolize these lipids, indicated that there are metabolic conditions that particularly favor the generation of important chemical messengers for oocyte development in Gir cows, as compared to that in Holstein cows.eng
dc.description.provenanceSubmitted by Marlom César da Silva (marlom.silva@unifal-mg.edu.br) on 2022-12-05T16:52:03Z No. of bitstreams: 2 Tese Dissertação de Asafe Costa Lopes.pdf: 2904688 bytes, checksum: ffad19998add3f7f4bcf48bdc921a52b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)eng
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dc.formatapplication/pdf*
dc.languageporpor
dc.publisherUniversidade Federal de Alfenaspor
dc.publisher.departmentInstituto de Ciências Biomédicaspor
dc.publisher.countryBrasilpor
dc.publisher.initialsUNIFAL-MGpor
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Biociências Aplicada à Saúdepor
dc.rightsAcesso Abertopor
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/-
dc.subjectGado de leitepor
dc.subjectProdução in vitro de embriõespor
dc.subjectQualidade oocitáriapor
dc.subjectPerfil lipídicopor
dc.subjectPerfil transcricional.por
dc.subject.cnpqMEDICINA VETERINARIA::REPRODUCAO ANIMALpor
dc.titleLipidoma e expressão gênica de oócitos obtidos de doadoras de genótipos leiteiros bos taurus, Bos indicus e Bos taurus/indicuspor
dc.typeTesepor
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