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Tipo do documento: Dissertação
Título: Avaliação da associação de um peptídeo imunogênico da proteína apolipoproteína n-acetiltransferase de Brucella abortus com nanopartículas de ouro sobre macrófagos : Efeito adjuvante de nanopartículas de ouro com peptídeo de Brucella abortus em macrófagos
Autor: ANDRADE, Alex Junior de 
Primeiro orientador: ALMEIDA, Leonardo Augusto de
Primeiro coorientador: VIRTUOSO, Luciano Sindra
Primeiro membro da banca: MACEDO, Gilson Costa
Segundo membro da banca: SILVA, Evandro Neves
Resumo: As bactérias do gênero Brucella, um cocobacilo gram-negativo, são classificadas com base em seus hospedeiros primários, tendo a Brucella abortus como a mais distribuída globalmente e afetando principalmente a população de bovinos, causando aborto e infertilidade. Atualmente a forma de controle dessa doença é a vacinação dos animais, porém as vacinas que são comercializadas utilizam cepas atenuadas, e apesar de imunogênicas, apresentam várias desvantagens, como a prevalência de testes soropositivos em bovinos, ocorrendo incidência de virulência e contaminação acidental. Devido a isso, as vacinas de subunidades são abordagens promissoras, seguras, eficazes e com menor custo para produção. Nessa perspectiva, o presente trabalho tem como objetivo geral avaliar a conjugação do peptídeo imunogênico "AIPYILESTPQALAH" de B. abortus cepa 2308 com AuNPs e caracterizar essa associação sobre macrófagos. As AuNPs foram sintetizadas, seguidas de imobilização com o 11-ácido mercaptoundecanóico (MUA) e funcionalização com a reação química de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida (EDC)/Nhidroxisuccinamida (NHS). Cada etapa da síntese foi avaliada e os componentes caracterizados por FTIR, MEV-FEG, UV/VIS e DLS. Os dados indicam sucesso na associação com AuNPs@MUA e o peptídeo. A fim de entender a influência do bioconjugado, macrófagos derivados da medula óssea murina (BMDM) foram obtidos e tratados. Pelo teste de MTT foi observada uma diminuição de viabilidade celular em torno de 40%, nas amostras com AuNPs independente da bioconjugação, mostrando certo grau de toxicidade das AuNPs. Entretanto, as AuNPs foram capazes de promover um aumento de atividade metabólica dos macrófagos, havendo consumo de glicose e maior produção de lactato, houve também uma secreção de citocinas pró-inflamatórias IL-6 e TNF-α, seguido de produção de óxido nítrico, indicando que a nanopartícula já é capaz de gerar um efeito adjuvante, enquanto que o bioconjugado apresentou as mesmas respostas, mas de maneira menos elevadas, indicando uma boa biocompatibilidade. Os resultados indicam um promissor bioconjugado para ser avaliado em modelos pré-clínicos para futuramente uma maior abrangência do potencial terapêutico e imunológico deste candidato vacinal.
Abstract: Bacteria of the genus Brucella, a gram-negative cocobacil, are classified based on their primary hosts, with Brucella Abortus as the most distributed globally and mainly affecting the cattle population, causing abortion and infertility. Currently the form of control of this disease is the vaccination of the animals, but vaccines that are marketed use attenuated strains, and although immunogenic, have various disadvantages, such as the prevalence of seropositive tests in cattle, occurring incidence of virulence and accidental contamination. Because of this, subunit vaccines are promising, safe, effective and lower cost for production. From this perspective, the present work aims to evaluate the conjugation of B. Abortus strain 2308 immunogenic peptide "AIPYILESTPQALAH” with AuNPs and characterize this association on macrophages. AuNPs were synthesized, followed by immobilization with 11-mercaptoundecanoic acid (MUA) and functionalization with the chemical reaction of 1-ethyl-3-(3- dimethylaminopropyl) carbodiimide (EDC)/N-hydroxysuccinamide (NHS). Each step of the synthesis was evaluated and the components characterized by FTIR, SEM-FEG, UV/VIS and DLS. The data indicate success in the association of AuNPs@MUA and the peptide. In order to understand the influence of the bioconjugate, murine bone marrow-derived macrophages (BMDM) were obtained and treated. The MTT test showed a decrease in cell viability of approximately 40% in the samples with AuNPs regardless of the bioconjugation, showing a certain degree of toxicity of AuNPs. However, AuNPs were able to promote an increase in the metabolic activity of macrophages, with glucose consumption and increased lactate production. There was also secretion of pro-inflammatory cytokines IL-6 and TNF-α, followed by nitric oxide production, indicating that the nanoparticle is already capable of generating an adjuvant effect, while the bioconjugate presented the same responses, but in a less elevated manner, indicating good biocompatibility. The results indicate a promising bioconjugate to be evaluated in preclinical models for a greater scope of the therapeutic and immunological potential of this vaccine candidate in the future.
Palavras-chave: Brucelose
Nanopartículas de ouro
Peptídeo
Vacinas de subunidade
Vacinologia reversa
Área(s) do CNPq: CIENCIAS BIOLOGICAS
Idioma: por
País: Brasil
Instituição: Universidade Federal de Alfenas
Sigla da instituição: UNIFAL-MG
Departamento: Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós-Graduação
Programa: Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas
Citação: ANDRADE, Alex Junior de. Avaliação da associação de um peptídeo imunogênico da proteína apolipoproteína n-acetiltransferase de Brucella abortus com nanopartículas de ouro sobre macrófagos : Efeito adjuvante de nanopartículas de ouro com peptídeo de Brucella abortus em macrófagos. 2024. 70 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Alfenas, Alfenas, MG, 2024.
Tipo de acesso: Acesso Aberto
URI: https://bdtd.unifal-mg.edu.br:8443/handle/tede/2599
Data de defesa: 2-Ago-2024
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