@MASTERSTHESIS{ 2018:767343486, title = {Identificação de candidatos vacinais em potencial para Trichosporon asahii por vacinologia reversa}, year = {2018}, url = "https://bdtd.unifal-mg.edu.br:8443/handle/tede/1316", abstract = "Os membros do gênero Trichosporon são leveduras do filo Basidiomycota sendo considerados patógenos oportunistas em pacientes imunocomprometidos. Trichosporon asahii já apresenta indícios de resistência à vários antifúngicos e é um dos principais causadores de infecções invasivas em humanos. Apesar de sua importância clínica, ainda não existem vacinas e imunoterapias para prevenir a doença nos principais grupos de risco. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo central identificar potenciais candidatos vacinais para direcionar a produção de imunobiológicos que possam conferir proteção a pacientes, através da tecnologia de vacinologia reversa, na qual não há necessidade de cultivar o microrganismo em laboratório, o que favorece a criação de uma vacina mais rápida. Para isso foram realizadas análises in silico utilizando o proteoma predito de T. asahii com 8.300 proteínas putativas, depositado no NCBI. Por análises do proteoma nos programas CELLO v.2.5 e PSORT II, 268 proteínas comuns foram preditas como extracelulares. A predição de imunogenicidade das mesmas foi realizada no programa VaxiJen v2.0, no qual foram obtidas 205 proteínas com potencial imunogênico (score ≥ 0.5). As proteínas selecionadas foram comparadas com o proteoma humano, através do BLASTp-NCBI. Das 205 analisadas, foram selecionadas 137 que não tiveram similaridade com proteínas humanas. Para identificar candidatos vacinais que poderiam induzir proteção cruzada, essas proteínas que não tiveram similaridade com proteínas humanas foram comparadas com as proteínas dos gêneros Cryptococcus spp. e Candida spp., através do BLASTp-NCBI. Os resultados indicaram a presença de 82 proteínas com similaridade com as proteínas de Cryptococcus spp. e 11 com Candida spp. Ao se selecionar aquelas com caracterização funcional e com similaridade e cobertura entre sequências > 50%, foi evidenciado que apenas 5 do gênero Cryptococcus spp. cumpriram os critérios de seleção. As 44 proteínas restantes que não obtiveram similaridade com nenhum dos gêneros fúngicos similares a Trichosporon spp. foram analisadas para identificar candidatos vacinais que poderiam induzir uma proteção somente contra T. asahii. O critério de seleção adotado foi analisar apenas proteínas que possuíam caracterização funcional por ontologia gênica com gêneros de fungos que já tiveram seus proteomas anotados, sendo que, das 44 proteínas, apenas 3 possuíam caracterização funcional. A partir disso, as 8 proteínas selecionadas tiveram seus epítopos mapeados através da ferramenta Tepitool para avaliar a capacidade de ligação ao MHC II em células T, sendo que todas as proteínas possuíam epítopos que se ligaram aos alelos HLA do MHC II. Em seguida, todos os epítopos com ligação ao MHC II foram analisados no programa VaxiJen 2.0, para avaliar sua capacidade imunoestimulante, com score > 0.5. Foram encontrados o mínimo de 20 epítopos imunoestimulatórios para proteção contra T. asahii na proteína Cutinase, e o máximo de 43 na proteína Curculin domain protein (mannose-binding) lectin, e para proteção cruzada, o mínimo de 18 epítopos e um máximo de 54, nas proteínas Major allergen Asp F2 e Glioxal oxidase precursor, respectivamente. Em seguida, foi realizada modelagem molecular das 8 proteínas através do software I-TASSER, para facilitar a localização dos epítopos imunogênicos, visualizados em 3D através do software VMD. Finalmente, foi realizada a cobertura populacional mundial dos epítopos para avaliar as diferentes especificidades de ligação aos HLA e para selecionar aqueles epítopos com maior cobertura na população humana. Foram selecionados 71 epítopos imunogênicos externos para proteção exclusiva para T. asahii e 132, para proteção cruzada de T. asahii e Cryptococcus spp., com uma taxa de cobertura mundial de 99.98%, indicando que alguns epítopos são ótimos candidatos vacinais para a criação de uma vacina com proteção exclusiva contra T. asahii e com proteção cruzada entre o gênero Cryptococcus spp. e T. asahii, respectivamente.", publisher = {Universidade Federal de Alfenas}, scholl = {Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas}, note = {Instituto de Ciências Exatas} }