@MASTERSTHESIS{ 2018:453088113,
 	title = {Caracterização molecular e análise da expressão gênica de adesivas na levedura emergente Trichosporon asahii},
 	year = {2018},
 	url = "https://bdtd.unifal-mg.edu.br:8443/handle/tede/1435",
 	abstract = "O gênero Trichosporon está classificado no filo Basidiomycota, é composto por 12 espécies, sendo Trichosporon asahii, a mais relevante clinicamente, causando infecções invasivas com mortalidade de até 80%. Isso deve-se não só o estado imunológico do paciente, mas também, a falhas nos tratamentos e formação de biofilmes em materiais implantados (cateteres), sendo resistente aos antifúngicos. A formação de biofilme depende de adesinas, que medeiam diferentes interações célula-meio, constituindo importante fator de virulência, que em Trichosporon nunca foram caracterizadas. Deste modo, o presente trabalho tem por objetivo caracterizar molecularmente genes codificadores de proteínas com potencial função de adesão. Para isso, foram realizadas buscas (tBLASTn-NCBI) por genes hipotéticos de adesinas no genoma da linhagem de referência de T. asahii CBS2479, depositado em banco genômico, a partir de 23 adesinas conhecidas de Candida albicans e Cryptococcus neoformans. Além disso foi analisado o seu proteoma por meio dos programas de predições de adesinas FungalRV e Faapred. No servidor CBS prediction, realizou-se predições de peptídeo sinal, via de secreção, presença de hélices transmembrana, glicosilações, manosilações e acetilações. Após essa seleção, realizou-se extração do DNA total dos quatro isolados de T. asahii (CBS2479, CBS7631, L2585 e L773) e PCR convencional, para verificação da existência das sequências. Em seguida prosseguiu-se com extração de RNA total dos quatro isolados cultivados de modo planctônico para análise de expressão gênica. Pelo tBLASTn revelou-se 1 proteína com 30% de identidade e 85% de similaridade com CFL1p de C. neoformans. Pelo FungalRV e Faapred, foram preditas 16 sequências em comuns como adesinas, sendo secionados 17 pelos 3 programas de análise. Após aplicação de critérios de inclusão como tamanho da proteína (≥300 aminoácidos), presença de regiões conservadas que indiquem função de adesão, presença de peptídeo sinal e ausência de hélices transmembrana, foram selecionados 4 genes para estudo. A primeira proteína, CFL1p-like, contém 325 aminoácidos e apresenta O-glicosilações em 4 resíduos de serina/treonina (ser/thr), sem predição para N-glicosilações, com presença de sítios de ligações de manoses em 14 resíduos de trioptofano (trp) e ausência de predição para de N-acetilação. A proteína Beta-like contém 1383 aminoácidos com 463 possíveis resíduos passiveis de O-glicosilações e 21 sítios preditos para N-glicosilações, não apresentando sítios de C-manosilação e N-acetilação. Já a terceira foi chamanda de Restina-like e contém 507 aminoácidos com 101 resíduos passíveis de receber O-glicosilação, sem sítios de N-glicosilação e N-acetilação, mas foi predita C-manosilação em apenas um resíduo. A última proteína selecionada contém 406 aminoácidos, com 65 resíduos passíveis de O-glicosilação e 12 de N-glicosilação, sendo ausentes sítios de C-manosilação e N-acetilação. Os quatro genes foram amplificados nos quatro isolados por meio da PCR convencional, e verificou-se por RT-PCR que todos os genes selecionados se apresentavam expressos nas linhagens. Os genes MAR-like, RES-like e BETA-like foram mais expressos na linhagem CBS2479 provenientes de micose de pele, demonstrando que o sítio de isolamento pode influenciar na expressão. Não foi possível relacionar a expressão gênica com capacidade de formação de biofilme dos isolados de hemocultura em crescimento planctônico. Contudo, as análises de expressão demonstram que o gene CFL1-like foi mais expresso nas de hemocultura CBS7631 e L773 que apresentavam morfologia predominante de artroconídeos, ao invés daquelas com morfologia filamentosa. Este trabalho ainda contribuiu para a anotação genômica das ORFs referentes aos genes, com modificação de hipotéticas para verificadas, ao identificar potenciais genes codificadores de adesinas no filo Basidiomycota utilizando como modelo, o patógeno emergente T. asahii.",
 	publisher = {Universidade Federal de Alfenas},
 	scholl = {Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas},
 	note = {Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós-Graduação}
}